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1. 技術背景與試劑盒組成
檢測原理：基于熒光染料特異性結合雙鏈DNA（dsDNA）的特性，通過PicoGreen染料與dsDNA結合后熒光信號增強數千倍，實現高靈敏度定量。
試劑盒組成：
DSDNA HS Assay Reagent（試劑A）：200×濃縮液（1.25 mL），含PicoGreen染料；
DSDNA HS Assay Buffer（緩沖B）：250 mL，用于稀釋樣品與試劑；
標準品1（C組份）：0 ng/μL dsDNA（TE緩沖液）；
標準品2（D組份）：10 ng/μL dsDNA（TE緩沖液）。
兼容性：適用于Qubit 2.0/3.0/4.0熒光計及熒光酶標儀，支持單次檢測1-20 μL樣品。
2. 性能指標與優(yōu)勢
靈敏度：可檢測低至0.2 ng/μL（200 pg/mL）的dsDNA，線性范圍10 pg/μL至100 ng/μL；
特異性：對dsDNA的選擇性＞99%，不受ssDNA、RNA、蛋白質或鹽離子干擾；
準確性：與qPCR結果相關性R2＞0.99，CV值＜5%（50次重復實驗）；
抗污染性：耐受1% SDS、500 mM NaCl、1 mg/mL BSA等常見污染物。
1. NGS文庫定量與質控
實驗設計：
提取DNA后，使用Qubit dsDNA HS Assay Kit定量文庫濃度；
稀釋文庫至推薦濃度（如Illumina平臺需2-10 nM），結合Qubit結果與Agilent 2100生物分析儀檢測片段分布。
結果示例：
定量某NGS文庫，Qubit檢測濃度為4.5 ng/μL（約2.8 nM），Agilent 2100顯示主峰位于350 bp，符合預期；
對比紫外分光光度計（Nanodrop）結果，Qubit濃度低15%，因Nanodrop高估了RNA與蛋白質污染。
2. 臨床樣本DNA定量
實驗設計：
提取患者外周血或組織DNA，使用Qubit檢測濃度；
結合qPCR驗證基因拷貝數變異（如腫瘤突變負荷檢測）。
結果示例：
定量乳腺癌患者cfDNA，Qubit檢測濃度為8.2 ng/μL，qPCR顯示TP53突變頻率為12%，與病理診斷一致；
對比紫外法，Qubit濃度誤差率＜8%，而Nanodrop誤差率達25%。
3. 微生物DNA定量
實驗設計：
提取細菌/病毒DNA，使用Qubit檢測濃度；
結合qPCR或數字PCR分析病原載量（如病毒載量檢測）。
結果示例：
定量新冠病毒RNA提取產物，Qubit檢測濃度為3.1 ng/μL（約1.9×10? copies/μL），qPCR結果與之高度相關（R2=0.98）；
對比紫外法，Qubit檢測下限低10倍，適合低載量樣本。
1. 實驗前準備
試劑配制：
將試劑A與緩沖B按1:200稀釋（如10 μL試劑A + 2 mL緩沖B），制備工作液；
標準品1與標準品2無需稀釋，直接使用。
儀器校準：
使用Qubit儀器時，選擇“dsDNA HS Assay"程序，預熱10分鐘；
使用酶標儀時，設置激發(fā)波長480 nm，發(fā)射波長520 nm。
2. 檢測流程
標準曲線建立：
取200 μL工作液分別加入2支Qubit管，加入10 μL標準品1與標準品2；
混勻后避光孵育2分鐘，插入Qubit儀器檢測，生成標準曲線。
樣品檢測：
取200 μL工作液加入Qubit管，加入1-20 μL樣品（建議體積1 μL）；
混勻后孵育2分鐘，檢測并記錄濃度。
3. 實驗后處理
廢棄物處理：
含染料的廢棄液按生物危害品處理，避免直接排放；
未使用的標準品與工作液可4℃保存1周，但建議現用現配。
儀器維護：
Qubit管使用后立即丟棄，避免重復使用；
酶標儀定期清潔光路，避免染料殘留。
Q1：Qubit檢測結果與qPCR差異較大？
A：
檢查qPCR引物特異性，避免非特異性擴增；
確認Qubit檢測范圍（10 pg/μL-100 ng/μL），超范圍樣本需稀釋；
對比qPCR標準曲線，確認擴增效率（90%-110%）。
Q2：樣品中含RNA或蛋白質如何處理？
A：
Qubit染料對dsDNA特異性＞99%，無需額外純化；
若需同時檢測RNA，可使用Qubit RNA BR Assay Kit（貨號Q32852）。
Q3：如何延長試劑盒有效期？
A：
試劑A避光保存于-20℃，避免反復凍融；
緩沖B與標準品4℃保存，避免高溫或光照；
開封后試劑盒6個月內使用完畢。
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